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微波消解法快速测定甘油三酯

时间:2008-09-03 08:28:11  浏览:        

国内有人将微波能应用于酶标板为载体的ELISA法检测甲胎蛋白 [1] 和在酶标仪上用酶标板作酶法甘油三酯的测定 [2],并获得了满意结果。酶法测定甘油三酯已被广泛使用,而当全自动生化分析仪发生故障时将直接影响工作,笔者利用微波能的特点建立了一种以酶标板单一酶试剂测定甘油三酯的方法,并作了方法学评价和统计学处理,取得了满意结果。现介绍如下。


      1 材料与方法


      1 试剂 甘油三酯酶法试剂盒(台湾标佳批号B21214)。


      1.2 仪器 
      香港产HERAL牌RE-563T型家用微波炉,输出功率500W,工作频率2450MHz。日本产岛津CL-7000型全自动生化分析仪。


       1.3 方法 
       取一块酶标板向空白孔(B)、标准孔(S)和测定孔(T)加重蒸馏水、标准液(TG含量为2.26mmol/L)、血清标本各5μl,加酶试剂250μl,放在微型振荡器上振荡30s后,置微波炉内微波辐射90s。取出后在酶标仪490nm波长下,以B孔校零读取T、S孔吸光度A,计算公式TG=t/s×2.26mmol/L。


       2 结果

      2.1 线性 取0.57、1.13、2.26、3.39、4.52、5.65、6.78mmol/L  TG标准液按微波法测定,结果在0.57~5.65mmol/L内呈良好线性。

       2.2 显色反应时间观察 
       标准液和血清标本各1份按上述方法操作置微波炉内辐射30、60、90、120、150、180s等不同时间后在酶标仪上读取吸光度A,血清为0.12、0.13、0.14、0.14、0.14、0.14,标准为0.24、0.24、0.25、0.25、0.25、0.25。

       2.3 显色稳定性观察 
       取TG标准液和血清标本各1份,按本法操作置微波炉内辐射90s显色后在酶标仪上立即、10、20、30、40、50、60min,读取吸光度,结果一致。

       2.4 精密度试验 取两份血清标本用微波法同时测定20次,结果批内(x±s)为(1.60±0.03)mmol/L,CV为1.86%和(2.71±0.064)mmol/L,CV为2.36%。用上述两份血清用本法连续10天上、下午各1次,结果批间(ˉx±s)为(1.62±0.04)mmol/L,CV2.47%和(2.73±0.081)mmol/L,CV2.97%。
      2.5 回收试验 
      取1份血清TG含量为1.14mmol/L的血清中加入不同浓度的标准液0.57、1.13、2.26、3.39mmol/L,实测回收值依次为0.58、1.12、2.21、3.24mmol/L,回收率为95.6%~101.7%,平均回收率为98.6%。
      2.6 对比试验 
     用岛津7000型全自动化分析仪与本法对40例临床血清标本作配对测试TG含量为0.58~7.92mmol/L,结果为Y=0.909X+0.156,r=0.9483,t=1.86P>0.05,两者差异无显著性。

     3 讨论

     原方法血清与酶试剂之比为1:100,考虑加样的准确性之比为1:50,故线性只能达到5.65mmol/L,但足以检测生理范围内的标本,对实际工作中>5.65mmol/LTG的标本应作适当稀释后再作测定,以获得准确结果。实验结果表明微波能不仅可作定性试验,也可用于定量试验中,而且把反应时间由原方法的15min缩短为90s,缩短了10倍。选购微波炉时要选微波辐射区辐射均匀的微波炉,同时应根据不同型号的微波炉以及室温的差异摸索出最佳反应时间。总之微波法测定TG具有简便、微量、快速等优点,能在一般酶标仪上比色,适用于一般基层实验室日常手工操作,也能在全自动化分析仪发生故障时作为可靠的应急替代。

  
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